Il s'agit de séparer les protéines en fonction de leurs propriétes physiques. Le professeur fait un rappel sur le principe de chromatographie. Cf schéma du cours.
La premiere technique présentée est la chromatographie d'exclusion stérique. Elle repose sur l'encombrement de la protéine dans l'espace. Contrairement à ce que l'on pourrait penser, les premières protéines à sortir de la colonne sont les plus grosses protéines, celles qui ne peuvent pas passer dans les petits labyrinthes des billes poreuses. La technique est détaillée dans la vidéo. Cf schéma du cours.
La deuxième technique présentée est la chromatographie échangeuse d'ions. Les protéines qui sortent les premières sont celles qui ne peuvent pas s'accrocher sur les billes chargées. Elles ont donc la même charge que les billes de la phase stationnaire de la chromatographie. La technique est détaillée dans la vidéo. Cf schéma du cours.
La troisième technique présentée est la chromatographie par affinité. Elle utilise la propriété de certaines protéines à s'affilier à un ligand spécifique greffé sur la phase stationnaire. La technique est détaillée dans la vidéo. Cf schéma du cours.
On utilise la technique PAGE : PolyAcrylamide Gel Electrophoresis. Il s'agit de la même technique qu'avec l'agarose précedemment détaillée dans une vidéo précedente. La technique est détaillée dans la vidéo. Cf schéma du cours
Si on veut utiliser cette technique pour séparer les protéines en fonction de leur poids moléculaire se pose alors une contrainte. En effet, les protéines sont chargées. Pour s'affranchir de cette contrainte on utilise la technique SDS : dodécylsulfate de sodium. Le SDS est un détergent fort possédant une longue queue hydrocarbonée hydrophobe et une extrémité chargée négativement. En se liant à la protéine, le SDS empêche son repliement et lui confère une charge nette négative. Pour les ponts disulfure on vient utiliser un agent réducteur.
L'association des deux techniques est appelée SDS-PAGE. La technique est détaillée dans la vidéo. Cf schéma du cours.